肺結(jié)核痰涂片檢查工作規(guī)范

肺結(jié)核痰涂片檢查工作規(guī)范

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痰涂片檢查是肺結(jié)核病人診斷與鑒別診斷、制定化療方案、療效考核的主要方法或手段。為貫徹落實(shí)市衛(wèi)生局《關(guān)于在全市一級(jí)以上醫(yī)療單位中開(kāi)展傳染性肺結(jié)核篩查工作的通知》的精神，加強(qiáng)傳染性肺結(jié)核病人發(fā)現(xiàn)力度，特制定本規(guī)范。

一、痰檢的對(duì)象和要求

（一）對(duì)象

1．咳嗽、咳痰≥3周或有咯血或血痰癥狀以及胸片異常者。

2．進(jìn)行療效考核的病人：凡已確診、登記、治療的肺結(jié)核病人，在化療期間應(yīng)按規(guī)定定期作痰菌復(fù)查。

1）初治涂陽(yáng)病人（含重癥涂陰病人）在療程滿2、5、6個(gè)月時(shí)，復(fù)治涂陽(yáng)病人在療程滿2、5、8個(gè)月時(shí)，各查痰一次。

2）初、復(fù)治涂陽(yáng)病人在療程滿2個(gè)月時(shí)，痰菌仍為陽(yáng)性者，應(yīng)在治療滿3個(gè)月時(shí)增加查痰一次。

3）確診、登記的涂陰肺結(jié)核病人，即使病人因故未接受治療，也應(yīng)在登記后滿2和6個(gè)月時(shí)進(jìn)行痰菌檢查。

（二）要求

1．初診病人應(yīng)送3份痰標(biāo)本（夜間痰、清晨痰和即時(shí)痰）。如無(wú)夜間痰，在留清晨痰后2～3小時(shí)再留取一份痰標(biāo)本；或在送痰時(shí)，留取兩份即時(shí)痰。治療中或復(fù)診隨訪病人按期每次送檢兩份痰（清晨痰和夜間痰）。

2．痰標(biāo)本采集：即時(shí)痰為病人就診時(shí)咳出的痰液。清晨痰為清晨深咳出的痰液。夜間痰為就診前一天晚睡前咳出的痰液。痰標(biāo)本應(yīng)以膿樣、干酪樣或膿性粘液樣性質(zhì)的痰液為合格標(biāo)本，痰量應(yīng)為3～5毫升。

應(yīng)由檢驗(yàn)人員或?qū)Ｈ蓑?yàn)收痰標(biāo)本，痰液不合格者，要求重新送檢。難以獲得合格標(biāo)本時(shí)，也應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查，但應(yīng)注明標(biāo)本性狀以供分析結(jié)果時(shí)參考。

痰標(biāo)本的容器，應(yīng)采用國(guó)家參比實(shí)驗(yàn)室推薦的國(guó)際通用痰瓶或采用直徑4厘米、高2厘米的塑料或涂蠟紙密閉盒。留痰容器上應(yīng)注明病人姓名、編號(hào)（門診序號(hào)或病人登記號(hào)）及日期。

3．痰標(biāo)本的保存和輸送：痰標(biāo)本容器密封，勿倒置，嚴(yán)防痰液外溢。不能立即作涂片檢查的痰標(biāo)本，須置4℃冰箱保存，防止痰液干涸或污染。需送上一級(jí)細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的痰標(biāo)本，外送前應(yīng)認(rèn)真核對(duì)痰標(biāo)本容器上標(biāo)

注，是否正確和清晰，是否與化驗(yàn)單一致。痰容器應(yīng)采用專用的結(jié)核桿菌和痰標(biāo)本冰盒運(yùn)送，或以紙張和塑料袋封裝、扎牢順序放置于包裝袋內(nèi)。盒外注明勿倒置標(biāo)志。

4．送檢時(shí)，縣（市、區(qū)）結(jié)防所（科）醫(yī)師應(yīng)填寫(xiě)檢驗(yàn)單。填寫(xiě)項(xiàng)目包括：病人姓名、地址、登記號(hào)（或門診序號(hào)）、送檢日期（或初診日期）、送檢原因（初診病人或隨訪病人）。檢驗(yàn)單應(yīng)與痰標(biāo)本分別放置在不同容器中，一齊送交上級(jí)實(shí)驗(yàn)室。

5．收到痰標(biāo)本后，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員仔細(xì)核對(duì)標(biāo)本和檢驗(yàn)單各項(xiàng)內(nèi)容，查看痰標(biāo)本是否合格。隨后按順序編號(hào)，及時(shí)檢查和登記。

6．廢棄標(biāo)本和污染物的處理：

1）痰盒和廢棄標(biāo)本等污染物，均須經(jīng)高壓蒸汽滅菌后才能丟棄或清洗，嚴(yán)禁不經(jīng)滅菌隨意處理。

2）痰盒等污染物如采用焚燒處理，須置于焚燒爐內(nèi)徹底焚化。焚化不徹底，或暴露焚燒是有害的。

3）痰檢工作臺(tái)面的消毒：可將痰標(biāo)本置于一搪瓷盤中，在操作廚中進(jìn)行痰涂片操作。涂片操作完成后，將盤與廢棄物等一并進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，或與操作臺(tái)面同時(shí)以3％石碳酸或其它可靠的消毒液擦拭后，再以紫外線滅菌燈（距離1米）照射30分鐘。

二、痰直接涂片檢查法

（一）涂片

取經(jīng)95％乙醇擦拭脫脂過(guò)的干燥、清潔、無(wú)油污、無(wú)劃痕的新玻璃片，于玻片背面的左端1／3處以藍(lán)色或黑色記號(hào)筆（玻璃鉛筆）編號(hào)。

用接種環(huán)或折斷的竹簽茬端，挑取痰標(biāo)本的膿樣、干酪樣部分約0．05～0．1ml，于玻片正面的右側(cè)三分之二處均勻涂抹成2×2．5厘米卵圓形痰膜。自然干燥后待檢。

一張玻片只可涂抹一份標(biāo)本。玻片只應(yīng)使用一次，不得清洗后再次使用。

（二）萋?tīng)柲釥栠d氏染色法（ZiehlNeelsen）

簡(jiǎn)稱萋尼氏染色法：

1．試劑：

1）堿性復(fù)紅乙醇染色儲(chǔ)存液：

堿性復(fù)紅液：8克堿性復(fù)紅溶于95％乙醇100毫升中。

5％石碳酸水溶液：5克石碳酸溶于100毫升蒸餾水中。

2）堿性復(fù)紅乙醇染色液：

10毫升堿性復(fù)紅儲(chǔ)存液與90毫升5％石碳酸水溶液混合。

3）5％鹽酸乙醇脫色液：

5毫升濃鹽酸與95毫升95％乙醇混合。

4）0。3％亞甲蘭復(fù)染儲(chǔ)存液：

0．3克亞甲蘭溶于50毫升95％乙醇中，完全溶解后加蒸餾水至終體積100毫升。

5）亞甲蘭復(fù)染液：

以蒸餾水10倍稀釋0．3％亞甲蘭復(fù)染儲(chǔ)存液即得亞甲蘭復(fù)染液。

2．染色步驟：

1）火焰固定涂片。

2）滴加堿性復(fù)紅乙醇染色液，蓋滿痰膜。小心火焰加熱至出現(xiàn)蒸汽后，脫離火焰，保持染色三分鐘。染色期間應(yīng)始終保持痰膜被染色液覆蓋，必要時(shí)可續(xù)加染色液。切勿使染色液沸騰。

3）流水自玻片背面上端輕洗，洗清染色液。

4）自痰膜上端外緣滴加脫色液，流過(guò)痰膜。需脫至痰膜無(wú)可視紅色為止。脫色應(yīng)單片進(jìn)行。

5）流水自玻片背面上端輕洗，去脫色液。

6）滴加亞甲蘭復(fù)染液，染色30秒鐘。

7）流水自玻片背面上端輕洗，去復(fù)染液。

8）待干后鏡檢。

3．鏡檢與報(bào)告：

光學(xué)顯微鏡鏡檢(目鏡lOX，油鏡IOOX)染色痰片。在淡藍(lán)色背景下，抗酸桿菌呈紅色，其它

細(xì)菌和細(xì)胞呈藍(lán)色。

按照下列標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告所得結(jié)果：

1）抗酸桿菌陰性：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。

2）抗酸桿菌可疑(土)：12條抗酸桿菌／300個(gè)視野。

3）抗酸桿菌陽(yáng)性(1+)：39條抗酸桿菌／100個(gè)視野。

4）抗酸桿菌陽(yáng)性(2+)：l9條抗酸桿菌／10個(gè)視野。

5）抗酸桿菌陽(yáng)性(3+)：l9條抗酸桿菌／每個(gè)視野。

6）抗酸桿菌陽(yáng)性(4+)：≥10條抗酸桿菌／每個(gè)視野。

鏡檢結(jié)果，應(yīng)及時(shí)記錄在“結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本“和化驗(yàn)報(bào)告單上。痰涂片化驗(yàn)單應(yīng)包括痰標(biāo)本的性狀。陰性結(jié)果應(yīng)填記“陰性”不得以“（）”表達(dá)。300個(gè)視野內(nèi)僅見(jiàn)1～2條抗酸桿菌者，應(yīng)在報(bào)告單上注明條數(shù)，醫(yī)生可結(jié)合胸片進(jìn)行判斷。必要時(shí)再取標(biāo)本復(fù)查證實(shí)，仍見(jiàn)1～2條抗酸桿菌／300個(gè)視野，該病例可確診為涂陽(yáng)病人。標(biāo)本應(yīng)在送檢48小時(shí)內(nèi)報(bào)告結(jié)果。

三、痰涂片質(zhì)控工作

為了進(jìn)一步提高痰檢涂片及診斷水平，市疾控中心每年兩次組織專家對(duì)市（縣）、區(qū)疾控中心痰片制做質(zhì)量和診斷水平進(jìn)行抽查。

擴(kuò)展閱讀：鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院結(jié)核病痰涂片檢查點(diǎn)設(shè)置及實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程

附件：

鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院結(jié)核病痰涂片檢查點(diǎn)設(shè)置及實(shí)驗(yàn)

室操作規(guī)程

在以縣（市）為單位實(shí)施現(xiàn)代結(jié)核病控制策略（DOTS）的地區(qū)，通過(guò)在鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院設(shè)結(jié)核病痰涂片檢查點(diǎn)（以下簡(jiǎn)稱查痰點(diǎn)），方便肺結(jié)核可疑癥狀者和疑似肺結(jié)核病人的就診查痰，以達(dá)到提高涂陽(yáng)肺結(jié)核病人發(fā)現(xiàn)率，縮短傳染性肺結(jié)核病人的就診延誤和治療延誤時(shí)間，降低結(jié)核病傳播的目的。

一、鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院查痰點(diǎn)工作職責(zé)

（一）鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院查痰點(diǎn)負(fù)責(zé)轄區(qū)及周圍鄉(xiāng)鎮(zhèn)肺結(jié)核可疑癥狀者和疑似肺結(jié)核病人的痰檢工作。

（二）查痰點(diǎn)是結(jié)核病診斷的初篩單位，凡痰涂片陽(yáng)性病人或痰涂片陰性但高度懷疑肺結(jié)核者需轉(zhuǎn)至縣級(jí)結(jié)防機(jī)構(gòu)進(jìn)一步檢查確診。

（三）鏡檢陽(yáng)性的痰涂片2日內(nèi)應(yīng)得到縣級(jí)結(jié)防機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)，陰性涂片一周內(nèi)應(yīng)得到縣級(jí)結(jié)防機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室的復(fù)驗(yàn)。痰涂片的轉(zhuǎn)送方法可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r決定。

（四）鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院查痰點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室須按要求做好痰涂片保存和各項(xiàng)資料的登記、統(tǒng)計(jì)管理工作。

二、查痰點(diǎn)的基本要求

（一）痰涂片檢查點(diǎn)首先應(yīng)做好實(shí)驗(yàn)室工作用房的準(zhǔn)備，根據(jù)鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院現(xiàn)有工作用房進(jìn)行合理調(diào)整和布局。實(shí)驗(yàn)室面積不小于10平方米，按功能劃分為操作區(qū)，用于痰涂片制備、染色，相對(duì)潔凈區(qū)，用于鏡檢、登記等（見(jiàn)圖1）。

（A）供收集痰標(biāo)本使用；（B）痰涂片制備；（C）染色池；（D）洗手池；（E）顯微鏡讀片；（F）實(shí)驗(yàn)室登記和痰涂片儲(chǔ)存

圖1：痰涂片檢查實(shí)驗(yàn)室基本布局

（二）依據(jù)《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》規(guī)定，查痰點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室須具備開(kāi)展痰涂片檢查工作的水源、消毒、污物處理等一般檢驗(yàn)條件。

（三）查痰點(diǎn)需有專人負(fù)責(zé)，技術(shù)人員須經(jīng)培訓(xùn)合格后方可從事痰涂片檢查工作（附表1）。

（四）查痰點(diǎn)需配備雙目顯微鏡一臺(tái)（含100倍油鏡）和紫外線燈；上級(jí)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)統(tǒng)一配備的染色試劑、登記本、檢驗(yàn)單、玻片、痰盒等日常工作物品。

（五）已具備上述基本條件的查痰點(diǎn)，經(jīng)地（市）級(jí)和縣級(jí)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)驗(yàn)收合格，并經(jīng)縣級(jí)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)上報(bào)省、地（市）級(jí)結(jié)防機(jī)構(gòu)備案后即可開(kāi)展工作（附表2）。

三、檢查對(duì)象

就診及轉(zhuǎn)診的疑似肺結(jié)核病人,一般包括持續(xù)咳嗽、咳痰超過(guò)3

周；咳血或伴有血痰；發(fā)熱或胸痛超過(guò)2周；胸部X線檢查異常。

四、檢查程序

（一）接診病人：對(duì)所有肺結(jié)核可疑癥狀者和疑似肺結(jié)核病人，應(yīng)在內(nèi)科或呼吸科門診進(jìn)行登記，由門診醫(yī)生開(kāi)具三張?zhí)低科瑱z查單（附表3）。

（二）痰標(biāo)本收集：在三個(gè)痰標(biāo)本盒上注明病人的姓名、編號(hào)、檢查日期和容器序號(hào)。病人首次留痰前應(yīng)指導(dǎo)病人，留取“即時(shí)痰”、“夜間痰”、“晨痰”合格的痰標(biāo)本，對(duì)所送不合格痰標(biāo)本除常規(guī)檢查外，應(yīng)要求患者重新送檢。

（三）實(shí)驗(yàn)室登記：按照年度病人序號(hào)和痰標(biāo)本序號(hào)在實(shí)驗(yàn)室登記本上進(jìn)行登記（見(jiàn)附表4），并以同樣的號(hào)碼在痰涂片檢查單上進(jìn)行標(biāo)記。檢驗(yàn)單的病人姓名應(yīng)與實(shí)驗(yàn)室登記本一致。

（四）痰涂片檢查：對(duì)病人送的痰標(biāo)本應(yīng)及時(shí)按操作規(guī)程進(jìn)行涂片、染色和顯微鏡檢查。

（五）痰涂片檢查結(jié)果登記與報(bào)告：及時(shí)在登記本上登記痰涂片檢查結(jié)果。當(dāng)病人的三次痰涂片檢查完成后，發(fā)現(xiàn)有陽(yáng)性痰涂片，應(yīng)在規(guī)定時(shí)間內(nèi)報(bào)縣結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)，縣級(jí)結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)應(yīng)及時(shí)對(duì)痰涂片進(jìn)行確認(rèn)。

（六）痰涂片的保存：每個(gè)查痰點(diǎn)鏡檢后的全部痰涂片應(yīng)按實(shí)驗(yàn)室登記本序號(hào)連續(xù)排列，分別存放在各點(diǎn)固定的玻片盒中，供上級(jí)實(shí)驗(yàn)室復(fù)核確認(rèn)。

（七）痰檢質(zhì)量控制：每個(gè)痰涂片檢查點(diǎn)均按照中國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃《痰涂片鏡檢質(zhì)量保證手冊(cè)》的要求，作為一個(gè)獨(dú)立的被質(zhì)控單位接受室間質(zhì)量評(píng)估和檢查工作。

五、痰涂片抗酸染色檢查法（一）痰標(biāo)本的采集

肺結(jié)核可疑癥狀者或肺結(jié)核病人送痰時(shí)，醫(yī)護(hù)人員或痰檢人員應(yīng)向病人解釋，使病人充分了解留好痰標(biāo)本的重要性，并指導(dǎo)病人如何從肺部深處咳痰。采集痰標(biāo)本時(shí)應(yīng)在遠(yuǎn)離人群的開(kāi)放空間進(jìn)行，或在通風(fēng)良好的室內(nèi)進(jìn)行。標(biāo)本量一般在3～5ml。

1、痰標(biāo)本盒：應(yīng)采用WHO推薦的國(guó)際通用螺旋蓋痰瓶，或可密封塑料盒、蠟紙盒收集痰標(biāo)本。痰標(biāo)本盒上注明病人姓名、編號(hào)、檢查項(xiàng)目和容器序號(hào)“1”、“2”、“3”（1為當(dāng)日即時(shí)痰，2為夜間痰，3為次日晨痰）。

2、痰標(biāo)本的性狀：合格的痰標(biāo)本應(yīng)是患者深呼吸后，由肺部深處咳出的分泌物。合格的痰標(biāo)本包括干酪痰、血痰、粘液痰。唾液或口水用于病人確診時(shí)為不合格痰標(biāo)本。

（1）干酪痰標(biāo)本外觀以黃色(或奶酪色)、膿樣、團(tuán)塊狀的肺部分泌物為主，粘度較粘液痰低，制片時(shí)較易涂抹；涂片染色后鏡檢，可發(fā)現(xiàn)大量膿性炎癥細(xì)胞、肺上皮脫落細(xì)胞。由于此類標(biāo)本是由肺部深處咳出，對(duì)肺結(jié)核的診斷最有價(jià)值，故抗酸桿菌陽(yáng)性檢出率較高。

（2）血痰此類標(biāo)本是因粘液痰或干酪痰標(biāo)本中混有血液而形成，顏色為褐色或深褐色、鮮紅色或伴有血絲；涂片染色后鏡檢除能夠觀察到粘液痰或干酪痰的細(xì)胞特征外，含新鮮血液的標(biāo)本中可見(jiàn)到被染色的血細(xì)胞。由于含血標(biāo)本易干擾抗酸桿菌鏡檢的結(jié)果，故在制片時(shí)應(yīng)盡量避免挑取含血標(biāo)本。

（3）粘液痰標(biāo)本外觀以白色、粘稠度較高的肺部和支氣管分泌物為主，制片時(shí)需仔細(xì)涂抹；涂片染色后鏡檢時(shí)，鏡下可見(jiàn)支氣管內(nèi)膜纖毛柱狀上皮細(xì)胞，伴有少量肺上皮脫落細(xì)胞、膿性炎癥細(xì)胞、口腔脫落細(xì)胞及口腔寄生菌。此類標(biāo)本的抗酸桿菌陽(yáng)性檢出率較唾液高。

（4）唾液目視觀察標(biāo)本整體外觀，以透明或半透明水樣、粘

度較低的口腔分泌物為主，標(biāo)本中有時(shí)伴有氣泡；涂片染色鏡檢時(shí)，鏡下可見(jiàn)少量口腔上皮脫落細(xì)胞和口腔內(nèi)寄生菌，有時(shí)可見(jiàn)食物殘?jiān)�。由于此類�?biāo)本進(jìn)行抗酸桿菌檢查時(shí)的陽(yáng)性檢出率很低，用于對(duì)患者確定診斷時(shí)是不合格的標(biāo)本。所以，當(dāng)病人初次留痰即為唾液時(shí)，應(yīng)囑病人重送并指導(dǎo)病人如何留取合格標(biāo)本。

3、痰標(biāo)本采集時(shí)間：根據(jù)痰標(biāo)本的采集時(shí)間，將痰標(biāo)本分為三類：

（1）即時(shí)痰病人就診時(shí)深呼吸后咳出的痰液。應(yīng)確保每個(gè)初次就診病人均留取即時(shí)痰進(jìn)行檢查。

（2）晨痰患者晨起立即用清水漱口后，咳出的第2口和第3口痰液。

（3）夜間痰送痰前一日，患者晚間咳出的痰液。（二）痰涂片制作

1、在進(jìn)行痰涂片檢查前對(duì)新的玻片用95%的乙醇擦拭（或浸泡）脫脂，經(jīng)干燥、清潔、檢查無(wú)油污、無(wú)劃痕后作為合格的玻片備用。在已經(jīng)準(zhǔn)備的痰玻片背面左端的1/3處注明編號(hào)(如使用的載玻片一端無(wú)磨砂面，使用玻璃刻刀注明編號(hào)；如使用的載玻片一端有磨砂面，可使用2B鉛筆在磨砂面上直接書(shū)寫(xiě))。

2、小心打開(kāi)痰標(biāo)本盒，防止產(chǎn)生氣溶膠或使標(biāo)本外溢。仔細(xì)觀察標(biāo)本，使用折斷的竹簽茬端，挑取痰標(biāo)本中干酪樣、膿樣或可疑部分約0.05～0.1ml，于玻片正面右側(cè)2/3處，均勻涂抹成10×20mm的卵圓形痰膜。痰膜朝上靜自然干燥后(一般約需要30分鐘)進(jìn)行染色鏡檢。當(dāng)氣溫低，痰膜不易干燥時(shí)，嚴(yán)禁將玻片直接在火焰上烘拷，以防產(chǎn)生氣溶膠或痰膜脫落。一張載玻片上只能涂抹一份痰標(biāo)本，一張載玻片只能使用一次，不得清洗后再次用于痰涂片染色檢查。

3、涂抹完畢后的痰標(biāo)本，在檢查結(jié)果報(bào)告前，應(yīng)暫時(shí)保留。以

備涂片、染色不合格影響鏡檢結(jié)果時(shí)，重新涂片和染色之用。

（三）萋－尼氏染色

1、涂片自然干燥后，放在染色架上，玻片間距保持在10mm以上的距離；火焰固定(在5秒鐘內(nèi)將玻片于火焰上來(lái)回烘烤4次)。

2、滴加石碳酸復(fù)紅染液，蓋滿痰膜，火焰加熱至出現(xiàn)蒸汽后，脫離火焰，保持染色5分鐘。染色期間應(yīng)始終保持痰膜被染色液覆蓋，必要時(shí)可續(xù)加染色液。加溫時(shí)勿使染色液沸騰。

3、流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去染色液，瀝去標(biāo)本上剩余的水。

4、自痰膜上端外緣滴加脫色劑布滿痰膜，脫色1分鐘；如有必要，需流水洗去脫色液后，再次脫色至痰膜無(wú)可視紅色為止。

5、流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去脫色液，瀝去玻片上剩余的水。

6、滴加亞甲藍(lán)復(fù)染液，染色30秒鐘。

7、流水自玻片一端輕緩沖洗，沖去復(fù)染液，瀝去標(biāo)本上剩余的水。待玻片干燥后鏡檢。

一張染色合格的痰玻片，由于被亞甲藍(lán)染色而呈亮藍(lán)色。將染色后的玻片放在報(bào)紙上，如果報(bào)紙上的文字透過(guò)痰膜不能被看清，表明該玻片涂抹過(guò)厚。

（四）顯微鏡檢查

1、使用10倍目鏡雙目顯微鏡讀片。

2、取染色完畢且已干燥的玻片，痰膜向上放在玻片臺(tái)上并以卡尺固定。首先使用40倍物鏡，轉(zhuǎn)動(dòng)卡尺移動(dòng)玻片至痰膜左端，將光線調(diào)節(jié)至適當(dāng)亮度，調(diào)節(jié)焦距至可見(jiàn)細(xì)胞形態(tài)；移開(kāi)40倍物鏡，在玻片上滴1～2滴鏡油，使用100倍油鏡進(jìn)行細(xì)致觀察。在淡藍(lán)色的背景下，抗酸菌呈紅色，其他細(xì)菌和細(xì)胞呈藍(lán)色。為防止抗酸桿菌

的交叉污染，嚴(yán)禁鏡頭直接接觸玻片上的痰膜。

3、讀片方法：首先應(yīng)從左向右觀察相鄰的視野；當(dāng)玻片移動(dòng)至痰膜一端時(shí)，縱向向下轉(zhuǎn)換一個(gè)視野，然后從右向左觀察，依此類推。通常10×20mm大小的痰膜，使用100倍油鏡，每行可觀察100個(gè)視野，觀察三行則約為300個(gè)視野。仔細(xì)觀察完300個(gè)視野，一般至少需要5分鐘以上。一位鏡檢人員連續(xù)閱讀10-12張玻片后應(yīng)休息約20分鐘。

4、分枝桿菌的基本形態(tài)：當(dāng)患者標(biāo)本直接進(jìn)行涂片鏡檢時(shí)，能夠發(fā)現(xiàn)不同種的分枝桿菌形態(tài)。結(jié)核分枝桿菌多數(shù)為桿狀、稍彎曲；菌體寬度0.3～0.6m；菌體長(zhǎng)度不一，在0.5～8m之間，多數(shù)在1.5～3.5m；含結(jié)核分枝桿菌較多的新鮮標(biāo)本經(jīng)萋－尼氏染色后，100倍油鏡觀察，可見(jiàn)單個(gè)存在的，也能看到聚集成簇或分枝狀排列的菌體，染色良好痰標(biāo)本，可見(jiàn)菌體內(nèi)著色較深的異染顆粒。

（五）鏡檢結(jié)果報(bào)告與登記

痰涂片鏡檢的結(jié)果報(bào)告，不僅是對(duì)結(jié)核病的診斷提供依據(jù)，報(bào)告的數(shù)量也一定程度的反映疾病嚴(yán)重程度和傳染性的大小。痰涂片鏡檢結(jié)果的登記應(yīng)按照鏡檢結(jié)果的分級(jí)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)登記在結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本上和痰檢驗(yàn)單上。不能只填寫(xiě)陰性、陽(yáng)性或(－)、(+)等。

萋尼氏染色鏡檢結(jié)果分級(jí)報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)

抗酸桿菌陰性(－)：連續(xù)觀察300個(gè)不同視野未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。

報(bào)告抗酸桿菌菌數(shù)：1～8條/300視野。抗酸桿菌陽(yáng)性（1＋）：3～9條/100視野�？顾釛U菌陽(yáng)性（2＋）：1～9條抗酸桿菌/10視野。抗酸桿菌陽(yáng)性（3＋）：1～9條抗酸桿菌/每視野。

抗酸桿菌陽(yáng)性（4＋）：≥10條抗酸桿菌/每視野。（六）抗酸染色玻片的處理

閱讀完萋尼氏染色玻片后，應(yīng)立即用浸滿二甲苯（分析醇）的擦鏡紙揭取數(shù)次，徹底去除玻片上的鏡油。經(jīng)脫油干燥后的玻片，按實(shí)驗(yàn)室序號(hào)及涂片編號(hào)放在玻片盒中，存放在陰涼干燥的環(huán)境中，以備復(fù)檢或質(zhì)控抽檢。

六、痰涂片抗酸染色檢查注意事項(xiàng)

痰涂片抗酸染色檢查要注意預(yù)防假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。假陽(yáng)性是指將陰性涂片錯(cuò)誤判讀為陽(yáng)性，假陰性是指將陽(yáng)性涂片錯(cuò)誤判讀為陰性。屬于技術(shù)因素的影響要通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)室內(nèi)和實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)量控制不斷改善。

（一）假陽(yáng)性結(jié)果的預(yù)防措施

1、必須使用新的載玻片進(jìn)行痰涂片檢查。2、每個(gè)標(biāo)本均使用一個(gè)新竹簽完成制片涂抹。3、所有染液均經(jīng)過(guò)過(guò)濾。

4、染色時(shí)玻片彼此之間保持一定距離，相互徹底分隔開(kāi)。5、嚴(yán)禁使用染色缸將玻片放一起染色。6、染色時(shí)勿使玻片上的染液干燥。

7、滴加鏡油時(shí)，嚴(yán)禁容器滴口直接接觸玻片痰膜。8、嚴(yán)禁物鏡鏡頭直接接觸玻片痰膜。

9、完整、準(zhǔn)確的標(biāo)注痰盒、玻片和實(shí)驗(yàn)室登記本的各項(xiàng)內(nèi)容。10、登記前、后對(duì)檢驗(yàn)單和標(biāo)本盒上的標(biāo)注進(jìn)行仔細(xì)核對(duì)。11、認(rèn)真按照要求讀片，準(zhǔn)確記錄和報(bào)告結(jié)果。（二）假陰性結(jié)果的預(yù)防措施1、確認(rèn)標(biāo)本是痰而非唾液。2、確認(rèn)每份標(biāo)本至少有3ml。

3、選擇膿樣、干酪樣、粘液分泌物涂抹制備玻片。4、制備玻片時(shí)標(biāo)本涂抹均勻，不要太厚或太薄。5、使用高質(zhì)量染料、嚴(yán)格按照配方配制染液。6、嚴(yán)格按照操作程序完成染色過(guò)程。

7、判斷結(jié)果為“陰性”前，必須閱讀規(guī)定要求的視野數(shù)。8、作為對(duì)照，可采用已知結(jié)果為陽(yáng)性的玻片，完成染色鏡檢過(guò)程。

9、完整、準(zhǔn)確地標(biāo)注痰盒、玻片和實(shí)驗(yàn)室登記本。10、登記前對(duì)檢驗(yàn)單和標(biāo)本盒上的標(biāo)注進(jìn)行仔細(xì)核對(duì)。11、準(zhǔn)確記錄和報(bào)告結(jié)果。七、痰玻片的保存

（一）鏡檢后的涂片應(yīng)及時(shí)用浸滿二甲苯的擦鏡紙徹底去除涂片上的鏡油。

（二）再次核對(duì)實(shí)驗(yàn)室登記本與每張涂片實(shí)驗(yàn)序號(hào)。（三）嚴(yán)禁在涂片上標(biāo)記鏡檢的陰、陽(yáng)性結(jié)果。

（四）按實(shí)驗(yàn)室登記本序號(hào)連續(xù)排列全部涂片，存放于玻片盒內(nèi)。（五）涂片保存與實(shí)驗(yàn)室登記本記錄應(yīng)保持一致。初診病人第一張涂片存入涂片盒后需預(yù)留出兩個(gè)空位，以備第二張、第三張涂片檢查后放入。

（六）保存近期3個(gè)月的全部痰涂片待各級(jí)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制抽檢，如果年涂片量不足500張，必須全部保存。

（七）裝滿涂片的玻片盒，需用標(biāo)簽注明涂片實(shí)驗(yàn)序號(hào)區(qū)間和日期區(qū)間，以便日后盲法復(fù)檢或現(xiàn)場(chǎng)評(píng)價(jià)時(shí)抽樣。

八、實(shí)驗(yàn)室管理（一）顯微鏡日常維護(hù)

顯微鏡作為發(fā)現(xiàn)涂片陽(yáng)性病人的重要設(shè)備，實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)正

確使用并給予正確維護(hù)，以保證其正常工作和延長(zhǎng)使用壽命。在使用和維護(hù)顯微鏡時(shí)應(yīng)特別遵守下列要點(diǎn)：

1、顯微鏡應(yīng)放在干燥、無(wú)塵和通風(fēng)的環(huán)境中。如果顯微鏡一段時(shí)期內(nèi)停止使用，應(yīng)拆開(kāi)并放在原包裝盒內(nèi)，并放有效的干燥劑。

2、使用前和使用后必須使用擦鏡紙徹底清潔物鏡。3、嚴(yán)禁物鏡鏡頭直接接觸玻片上痰膜。4、使用油鏡時(shí)，只能使用細(xì)螺旋調(diào)節(jié)焦距。

5、使用電光源顯微鏡時(shí)，注意電壓和電流是否與儀器要求相匹配。

（二）耗材供應(yīng)與管理

為保障痰涂片檢查工作能夠連續(xù)不斷開(kāi)展，應(yīng)儲(chǔ)存一定數(shù)量的實(shí)驗(yàn)耗材和相應(yīng)試劑，儲(chǔ)備量可根據(jù)工作量來(lái)進(jìn)行計(jì)算，一般應(yīng)準(zhǔn)備比平均工作量高20％的相應(yīng)耗材和試劑。染色試劑應(yīng)由省結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室或經(jīng)省級(jí)結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了質(zhì)量控制的地（市）級(jí)結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室組織統(tǒng)一配制和供應(yīng)，其它耗材可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r由省、地或縣統(tǒng)一供應(yīng)。各項(xiàng)物資、耗材按照需要供應(yīng)，并保證達(dá)到質(zhì)量要求。每個(gè)查痰點(diǎn)每檢查1000份痰標(biāo)本所消耗的材料列表如下：

材料痰盒竹簽載玻片載玻片盒(100張/盒)初診病人登記本實(shí)驗(yàn)室登記本痰涂片檢查單記號(hào)筆（玻璃刻刀或2B鉛筆）10

用量（每檢查1000份痰標(biāo)本）1200個(gè)1200個(gè)1200張10個(gè)1本1本20本（50張/本）2支試劑名稱用量（每檢查1000份痰標(biāo)本）石碳酸復(fù)紅5000ml亞甲基藍(lán)5000ml5%鹽酸酒精10000ml鏡油二甲苯定性濾紙擦鏡紙110ml110ml6張1本（三）實(shí)驗(yàn)室人員安全防護(hù)

1、嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程，實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員必須經(jīng)過(guò)生物安全培訓(xùn)后方可上崗。

2、嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室安全操作規(guī)程，警惕分枝桿菌氣溶膠的產(chǎn)生。3、實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格限制非實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)入，減少實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外交叉生物污染。完成實(shí)驗(yàn)工作離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室，要關(guān)好門窗。

4、進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，盡量避免攜帶非必需物品。實(shí)驗(yàn)臺(tái)上不放任何與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的物件或私人用品。

5、工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)穿工作服并注意著裝整齊，操作時(shí)應(yīng)戴口罩、帽子和手套，長(zhǎng)發(fā)者須將頭發(fā)裝束在帽子內(nèi)。

6、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)保持肅靜，試驗(yàn)過(guò)程中禁止一切與試驗(yàn)無(wú)關(guān)的活動(dòng)，以保證集中精力完成實(shí)驗(yàn)操作。

7、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止吸煙、飲食及用嘴濕潤(rùn)鉛筆或標(biāo)簽等，也不要以手撫摩頭面部等。

8、實(shí)驗(yàn)前須開(kāi)啟紫外燈對(duì)實(shí)驗(yàn)室和操作區(qū)域進(jìn)行照射消毒1小時(shí)以上；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，開(kāi)啟紫外燈對(duì)操作區(qū)和實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行照射消毒2小時(shí)以上。

9、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，操作人員要用清潔劑（或肥皂）和清水充分洗凈。

10、每次實(shí)驗(yàn)操作終止后，必須清理好實(shí)驗(yàn)臺(tái)，所有物品歸位并用70%酒精或3-5%石碳酸等有效消毒劑擦洗實(shí)驗(yàn)臺(tái)和地面。

11、實(shí)驗(yàn)室中的生物危險(xiǎn)物要根據(jù)檢查項(xiàng)目和性質(zhì)的不同，局限

在相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室或試驗(yàn)區(qū)域內(nèi)，不得隨意將其帶到其它區(qū)域進(jìn)行。

（四）污物消毒與處理

1、痰標(biāo)本、被污染的一次性用品及實(shí)驗(yàn)室垃圾應(yīng)經(jīng)高壓滅菌后丟棄，或者使用專用的焚燒爐或固定的垃圾坑進(jìn)行焚燒。

2、每次完成檢查后，操作臺(tái)和實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)經(jīng)紫外燈近距離照射消毒2小時(shí)以上。

3、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，如標(biāo)本被打翻污染了操作臺(tái)或地面，應(yīng)以大于污染面積的紗布或衛(wèi)生紙吸滿5%的苯酚溶液或70%酒精，覆蓋污染區(qū)，30分鐘后方可移去，再經(jīng)紫外線近距離照射。

附表：1、鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院痰檢人員培訓(xùn)記錄表

2、基本情況調(diào)查表3、檢驗(yàn)單參考式樣

4、結(jié)核病細(xì)菌學(xué)實(shí)驗(yàn)室登記本

附表2：

______縣（市）基本情況調(diào)查表

一、一般情況

省名：地（市）名：縣（市）名：縣編碼：上年末人口數(shù)（萬(wàn)）：地理面積:(平方公里)地貌特征：山區(qū)丘陵平原湖區(qū)貧困縣：是（國(guó)家級(jí)、省級(jí)）否鄉(xiāng)鎮(zhèn)數(shù):村數(shù):縣級(jí)綜合醫(yī)院數(shù)目（個(gè)）:鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院數(shù)目（個(gè)）:中心衛(wèi)生院數(shù)目（個(gè)）:

二、縣（市）結(jié)核病防治機(jī)構(gòu)情況全縣開(kāi)始實(shí)施DOTS的時(shí)間:200年月

從事結(jié)防工作的專職人員數(shù):人，兼職人員數(shù)：人從事痰涂片檢查的專職人員數(shù):人，兼職人員數(shù)：人其中鄉(xiāng)鎮(zhèn)痰檢點(diǎn)的專職人員數(shù):人，兼職人員數(shù)：人

專職痰涂片檢查人員經(jīng)過(guò)省級(jí)專業(yè)培訓(xùn)：人，地市級(jí)專業(yè)培訓(xùn)：人結(jié)防所距縣邊界最遠(yuǎn)距離：公里最近距離：公里

三、縣（市）結(jié)核病防治工作情況

上一季度初診病人就診情況：初診病人數(shù)合計(jì)：

其中：縣級(jí)及以上綜合醫(yī)院轉(zhuǎn)診病人數(shù):

鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院轉(zhuǎn)診病人數(shù):病人自行就診人數(shù)：

上一季度肺結(jié)核可疑癥狀者和疑似肺結(jié)核病人數(shù)：上一季度胸部X線異常人數(shù)：

上一季度查痰人數(shù)：痰標(biāo)本檢查數(shù)：發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性痰標(biāo)本數(shù)：上一季度發(fā)現(xiàn)活動(dòng)性肺結(jié)核病人數(shù):

其中：涂陽(yáng)病人總數(shù):

新涂陽(yáng)病人數(shù):涂陰病人數(shù):

四、鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院設(shè)置痰涂片檢查點(diǎn)情況

點(diǎn)序號(hào)鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院（中心衛(wèi)生院）名稱人口覆蓋（萬(wàn)人）覆蓋鄉(xiāng)數(shù)（個(gè)）上一年平均日門診量平均服務(wù)半徑（公里）距縣結(jié)防所的距離（公里）實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)地（有、無(wú)）基本條件實(shí)驗(yàn)室上下水道（有、無(wú)）實(shí)驗(yàn)室人數(shù)雙目顯微鏡（有、無(wú)）以及使用年限是否有油鏡頭

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