微生物實驗心得體會

微生物實驗心得

姓名：關琦琦學號：09070401048班級：生物科學09-2班指導老師：吾爾恩微生物實驗心得

本學期已臨近尾聲，我們即將告別微生物實驗這門課程，在這一學期，八個微生物實驗中，我們學到了許多知識，這些知識將會陪伴我們一生，下面我們就來通過一些實驗來回顧一下本學期的微生物實驗。

我選取的實驗是《環(huán)境因素對微生物的影響》，之所以選擇這則實驗是因為這則實驗比較簡單，而且涉及面非常多。首先我們來分析一下這則實驗所涉及到的知識面。環(huán)境對微生物生長影響主要分以下幾種

溫度：通過影響蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子的結構與功能以及細胞結構入細胞膜的流動性及完整性來影響微生物的生長、繁殖和新陳代謝。微生物群體生長、繁殖最快的溫度為其最適生長溫度。

PH:H+影響菌體細胞質(zhì)膜上電荷性質(zhì)，微生物吸收物質(zhì)變化，影響代謝，高濃度H+或引起菌體表而蛋白質(zhì)和核酸水解以及影響酶和活性.

滲透壓：微生物在等滲溶液中可正常生長繁殖；在高滲溶液中細胞失水，生長受到抑制；在低滲溶液中，細胞吸水膨脹，因為大多數(shù)微生物具有較為堅韌的細胞壁，細胞一般不會裂解，可以正常生長，但低滲溶液中溶質(zhì)含量低，在某些情況下也會影響微生物的生長。

抗生素：在自然界中普遍存在微生物間的拮抗作用，許多微生物可以產(chǎn)生抗生素，能選擇性的抑制或殺死其他微生物。

微生物的實驗其實簡單來說步驟幾乎相同：制作培養(yǎng)基、倒平板、接種微生物、培養(yǎng)、觀察菌種生長情況從而得出結論。本次實驗也是這樣首先制作培養(yǎng)基，在進行倒平板步驟時，對平板環(huán)境進行區(qū)分，然后進行接種。

在進行倒平板的時候，要注意在無菌條件下進行倒置，同時也要保持平板的厚度均勻。

在進行菌種接種的時候，選擇合適的劃線方式，一般是選擇Z字形劃線法，注意不要把平板弄破，等到平板凝固后才可以進行接種。接種時也要注意在無菌條件下接種。經(jīng)過培養(yǎng)后，再觀察最后得出結論。

通過一學期的實驗，我越發(fā)的明白實驗操作對于結果的重要性。實的基礎。實驗操作可以說是實驗成功與否的關鍵部分，可是馬虎不得。對于需要團隊合作的實驗，個人認為要有強勢的人員搭檔，不說是精通實驗操作規(guī)程，最少也得知道實驗的基本操作，掌握要做實驗的操作方法，這對于后續(xù)的實驗無疑是與決定性作用的。對于個人的實驗能力，關鍵還是要看平時的積累，有些實驗操作繁瑣復雜，需要極大的耐心，這些都應該是逐漸培養(yǎng)起來的。最后，簡單談一下自己在微生物實驗室做實驗的心得體會。剛開始的時候，最令我頭痛的就是培養(yǎng)基的配制、消毒滅菌，培養(yǎng)基的配制和消毒與滅菌兩個實驗可以說是微生物實驗的最近本課程，內(nèi)容有配制培養(yǎng)基、分裝培養(yǎng)基、為下次試驗準備菌種及無菌器材等，內(nèi)容顯得非常繁多緊湊，需要準備的器材、藥品及用具較多、較雜、較細。最后只能是提前參照微生物實驗教材，將實驗過程中所涉及到的藥品、器材及儀器等統(tǒng)統(tǒng)羅列出來，計算出實驗時大小材料需用的數(shù)量，這樣，一方面可以有效避免在實驗準備時遺忘相關物品，另一方面也可為以后同一實驗的準備工作提供依據(jù)，使實驗準備工作逐步趨于程序化，從而在有效低實驗準備工作量的同時，最大限度地提高準備效率。還有一點很重要，在科研型實驗室里就不能不說導師和師兄師姐，其實他們才是最具價值的“活文獻”，他們就是實驗室里的參考文獻，活參考書。生物就是一門實驗的科學，其中科研經(jīng)驗的積累就是一個非常重要的組成部分，導師和師兄師姐的一句話往往可以事半功倍，大幅提高實驗的成功率和效率�？傊�，為了保證實驗過程高質(zhì)高量完成，除了實驗準備及實驗過程外，還要求實驗技術人員必須具備相應的素質(zhì)，實驗操作人員必須具備較扎實的專業(yè)基礎、熟練的實驗技能及高度的責任心，在工作中要善于總結，同時還要和理論課老師積極溝通，這樣才能夠真正的學好微生物實驗這門課程。

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食品衛(wèi)生綜合檢驗試驗總結

食品質(zhì)量091金秀建201*016521

為期五天（201*年6月11日-15日）的食品衛(wèi)生綜合檢測實驗已經(jīng)告一段落了，在這一周的微生物實驗主要包括牛奶中大腸菌群的計數(shù)、雞蛋中沙門氏菌的檢驗和牛奶中金黃色葡萄球菌的檢驗三個實驗，經(jīng)過三個綜合實驗的課程，能讓我更能理解試驗時要掌握的細節(jié)，也要保持頭腦的時刻清醒。同時讓我對這三種微生物有了更進一步的認識，同時讓我也對實驗也更加熟悉了。

首先我們做的是大腸菌群的計數(shù)，它是采用MPN（最大可能數(shù)法）的計數(shù)來測定的。大腸菌群的特性為：在37℃，24小時內(nèi)能發(fā)酵乳糖，產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，好氧或兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌，一般認為該菌群細菌可包括大腸埃希氏菌、檸檬酸桿菌、產(chǎn)氣克雷白氏菌和陰溝腸桿菌等。其檢測原理為細菌在樣品內(nèi)的分布是隨機的，所以檢測細菌時，可按概率理論計算菌數(shù)。大腸菌群MPN計數(shù)的檢驗程序為樣品的稀釋、初發(fā)酵試驗、復發(fā)酵試驗和最后的大腸菌群最可能數(shù)(MPN)的報告。那么在第一天的上午，老師基本給我們講了實驗的原理和步驟，以及一些需要注意的地方，我們便開始計算自己需要配制的實驗試劑的量，并且稱取試劑的量和清洗所要用的實驗器皿，首先配置的是生理鹽水和LST肉湯，并且把生理鹽水和LST肉湯分裝到試管內(nèi)，蓋好蓋子包扎好進行滅菌，滅完菌也就到了吃飯時間，等下午來接種培養(yǎng)了。

牛奶樣品與生理鹽水以1:9的比例進行混合，搖勻后做10倍系列的稀釋，做了3個稀釋度。隨后將三個稀釋度的樣品勻液以每個稀釋度3支試管接種到內(nèi)裝小導管的含LST肉湯的試管中，最后放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。在經(jīng)過24h的培養(yǎng)后，所有的試管內(nèi)均產(chǎn)生氣體，而后我們要將培養(yǎng)后的有菌落的LST肉湯接種到BGLB肉湯試管中進行培養(yǎng)24-48h，觀察后發(fā)現(xiàn)所有的BGLB管都產(chǎn)氣，顏色也有原來的綠色變成暗黃色，證明也產(chǎn)生了酸，所以記為所有產(chǎn)氣管為大腸菌群陽性管。最后查MPN表可得出每毫升樣品中大腸菌群的MPN為大于等于1100ml/MPN。

我們小組在做大腸菌群測定還是很順利的，中途沒有出現(xiàn)什么錯誤，實驗很順利，小組成員的配合和分工也都很好。

第二個實驗是雞蛋中的沙門氏菌的檢測，他的特性是：沙門氏菌需氧或兼性厭氧，10-42℃都可生長，最適溫度為37℃，大部分可發(fā)酵葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，是革蘭氏陰性的無芽孢桿菌。在營養(yǎng)瓊脂平板上生長產(chǎn)生光滑，濕潤，半透明，邊緣整齊的菌落。在血平板上產(chǎn)生透明溶血環(huán)，形成大小中等的灰白色菌落。實驗過程可分為前增菌、選擇性增菌、選擇性平板分離、生物化學篩選四個階段。

實驗首先配制BPW溶液，進行分裝和高壓滅菌，在無菌條件下，移取5ml雞蛋液樣品于盛有45mlBPW的組織培養(yǎng)瓶中，混勻，放置于36℃±1℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h±2h，觀察生長現(xiàn)象。接下來的增菌階段，需要配制TTB增菌液和SC增菌液，移取1ml的前增菌液接種到10mlTTB增菌液內(nèi)，在恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h～24h，SC增菌液過程與TTB一樣。接下來需要制備BS平板和HE平板，等平板凝固后便可以開始接種了，是采用平板分多區(qū)劃線的方法，然后放在37度溫箱培養(yǎng)18~24h。最后要進行生化實驗，要先配制三糖鐵瓊脂，從培養(yǎng)皿的平板上挑取可疑菌落，接種到三糖鐵瓊脂，先與底層穿刺，再在斜面劃線。同時把菌落接種到各種生化試劑里，封口后一起放入恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)18h。取出培養(yǎng)皿和生化小試管觀察結果，記錄。

第三個實驗是金黃色葡萄球菌的檢驗，它的特性一般是無芽孢，鞭毛。大多數(shù)無莢膜，革蘭氏染色陽性，它培養(yǎng)的營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上就能生長良好，需氧或兼性厭氧。在血平板上培養(yǎng)會使紅細胞破裂，形成透明的溶血環(huán)。在顯微鏡下可以看到是紫色的，排列成葡萄狀的圓形的菌。

首先是樣品的處理，稱取22g7.5%氯化鈉肉湯溶解于250ml水中，在每個均質(zhì)瓶內(nèi)移取45ml，同時制取Baird-Parker培養(yǎng)基，高壓滅菌后吸取牛奶樣品5ml到均質(zhì)瓶內(nèi)。放入恒溫箱培養(yǎng)18-24h。然后用接種環(huán)取培養(yǎng)物分別劃線接種到Baird-Parker平板和血平板上，培養(yǎng)18-24h，Baird-Parker平板有可能需要培養(yǎng)45-48h。最后進行血漿凝固酶試驗，挑取BP平板或血平板上可疑菌落1個或以上，分別接種到5ml左右BHI肉湯中，36±1℃培養(yǎng)18-24h。取新鮮兔血漿0.5ml，加入BHI培養(yǎng)物0.2-0.3ml，振蕩搖勻，置36±1℃溫箱培養(yǎng)，半小時觀察一次，6小時觀察，直至出現(xiàn)凝固，判為陽性結果。也有小組6h后也沒凝固的，則判為陰性。最后進行革蘭氏染色實驗，觀察細菌的形態(tài)特征。最后記錄結果。

三個實驗雖然不多，但是三個實驗的跨度剛好是一個星期，所以我們實驗剛好可以做完，實驗從剛開始的懵懂到慢慢的熟悉，到最后的成功，少不了的是小組合作和老師的幫助。經(jīng)過三個微生物的實驗，讓我對微生物實驗的過程。不過對于微生物的實驗一定要細心，一個是它需要的時間很長，要滅菌和培養(yǎng)，如果做錯都得重新再來，并且實驗過程中不能被污染，否則會對實驗結果造成一定的污染或完全不可用。對實驗流程一定要熟悉，現(xiàn)象一定要觀察仔細，因為類似的菌類有很多，其生產(chǎn)的習性也類似，若不觀察仔細，就會有結果的偏差。我們小組的實驗都很順利，中途雖有一點點過失，但對實驗的進度和結果沒有什么大的影響，實驗結果也是讓我們蠻有成就感的，感謝小組的配合。操作不像理論，只有多次練習才有體會，在今后的實驗中，我會更加努力。

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