生化實驗室必備技能

生化工程研究室實驗技能系列講座（一）主講人：賈老師協(xié)理：譚老師整理：穆彩云

一、玻璃儀器的洗滌

為了排除生物實驗中外來因素的干擾，提高實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可信性，必須對實驗中的干擾因素進(jìn)行消除。其中實驗中常用的玻璃儀器的洗滌就是消除干擾的一個重要組成部分。應(yīng)當(dāng)根據(jù)實驗的要求，污物的性質(zhì)和沾污的程度來選擇。一般有下列幾種洗滌方法。1.用水刷洗：

此法既可洗去溶于水的物質(zhì)，又可使附著在儀器上的塵土和不溶性物質(zhì)脫落下來，但對油污效果并不好。洗刷時，且要選用合適的刷子，如用試管刷去洗燒杯，就不合適。因為試管刷太細(xì)，不易將燒杯底洗凈。若刷子頂端無毛，則不宜使用，易損壞玻璃器皿。

2.用洗衣粉或合成洗滌劑刷洗：

對于一般油污及不溶物沾附較牢的器皿的可以采用此方法刷洗�，F(xiàn)將儀器在洗衣粉中浸泡一段時間，再用合適的刷子洗滌。洗后的器皿必須要用自來水將殘存的洗衣粉或合成洗滌劑沖洗干凈才能使用。3.采用洗液洗滌

適宜于一些對潔凈程度要求較高的定量器皿（如滴定管、容量瓶、移液管等），以及一些形狀特殊、不能用刷子刷洗的儀器。使用洗液前先用水洗，把水倒凈后注入少量洗液，慢慢轉(zhuǎn)動儀器，使器壁上全部被洗液潤濕后，再把洗液倒回原來的瓶內(nèi)，然后用水沖洗掉殘留的洗液。如果用洗液把儀器浸泡一段時間后，或用熱的洗液洗滌，則效果更好。

值得注意的是，色譜質(zhì)譜聯(lián)用的樣品需要相對潔凈度更高，所以經(jīng)水洗、酸浸泡，水洗等諸多步驟，因為玻璃去污劑、表面活性劑會有離子抑制現(xiàn)象發(fā)生，表面活性劑產(chǎn)生的加合物和離子簇會干擾質(zhì)譜數(shù)據(jù)，因此作液質(zhì)聯(lián)用儀時，不要使用洗滌劑清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建議超聲清洗多次。

4.超聲洗滌

洗普通的玻璃儀器可以放在超聲波里加上洗滌劑超半個小時，拿出來用水沖干凈，然后再用蒸餾水沖洗2-3次，就可以放在烘箱里烘干了，一定要記住要用蒸餾水沖一下，否則干燥出來的瓶子會有洗衣粉的痕跡。但用超聲波洗滌玻璃器皿，時間長了會使玻璃表面受損剝落的。5.其他

如果玻璃儀器上沾有凡士林、松香、石蠟等污物，用有機(jī)化合物如酒精、乙醚、丙酮、苯、汽油等洗滌效果較好。

以上介紹了幾種洗滌方法，可根據(jù)不同的要求進(jìn)行選擇。所有儀器用水沖洗干凈后，均要再用去離子水或蒸餾水沖洗二三次。洗凈的儀器，應(yīng)不掛水珠，將儀器倒置時，水會順著器壁流下，器壁上只留下一層既薄又均勻的水膜。即洗滌干凈的標(biāo)準(zhǔn)為“干凈、透明、不掛水珠”。洗凈后的儀器不能用紙或布擦拭，以免造成二次污染。

二、槍頭及其他特殊樣品的洗滌：

對于PCR以及一些分子實驗或使用體積小于10l的槍頭，建議一次性使用。槍頭在使用后，應(yīng)在未干時馬上放到水中，等待試驗結(jié)束后一齊放到洗衣粉溶液中煮半小時左右，沖干凈后再用自來水煮半小時。載玻片的清洗相似于槍頭清洗，只是最后要用配制好的酒精溶液擦凈后才可放入酒精溶液中。三、干燥

1.可置于干燥處或儀器架上自然晾干。

2.放入恒溫箱內(nèi)烘干，放入前應(yīng)該將儀器內(nèi)的水倒凈；對于一些熱敏性的物質(zhì)如塑料制品，恒溫箱溫度保持在60℃左右。

注：有塞子或蓋子的容器，必須拔去塞子、蓋子、活塞后方可放入烘箱烘干。拔下的塞子、蓋子、活塞也不可隨便擺放，應(yīng)放到一處，待儀器烘干后塞子和瓶子要配套放好。四、實驗室廢物的處理

酸堿溶液應(yīng)該統(tǒng)一回收，但考慮實際情況，少量的酸堿可以再經(jīng)水大量稀釋后緩慢倒入下水道中。多數(shù)緩沖液可直接倒入下水道。

對于液體培養(yǎng)基、細(xì)菌培養(yǎng)的上清的處理最好倒入廁所中，之前最好經(jīng)高壓滅菌處理或10％的次氯酸鈉處理。

對于一些有害化學(xué)廢物，如酚，EB（溴化乙啶）等也不建議清洗。

五、溶液的配制

1．熟悉整個配制程序，記錄下所需要用到的試劑名稱，確定好每一種試劑要配置量的多少，勿配多而造成浪費(fèi)，對于一些不穩(wěn)定的溶液最好現(xiàn)用現(xiàn)配。2.安全性：清楚所接觸藥品的組分及相關(guān)毒性，遵照處理物質(zhì)標(biāo)簽上的告示操作。工作時要佩戴合適的手套，注意自身及他人的安全。對于一些揮發(fā)性物質(zhì)應(yīng)該到通風(fēng)廚中操作。

3.稱量藥品要遵循所需藥品的使用量以及試驗要求的誤差級別來選用哪種天平。實驗室有電子天平（精度0.1g）和電子分析天平（精度0.0001g）兩種。平常配制溶液時用電子天平即可。

4.溶劑水的選�。簩τ诰彌_溶液以及培養(yǎng)基的配置可以使用蒸餾水。而對于一些對水有特殊要求的試驗，應(yīng)使用超純水。

5.溶解溶質(zhì)時，玻璃棒的要輕輕攪拌，不可用力過猛造成儀器損壞，對于一些難以溶解的試劑的配置，可以考慮采用加熱或者超聲的辦法，但對于熱敏物質(zhì)除外。6.將配制好的試劑放入洗凈的試劑瓶中，試劑瓶上必須貼有標(biāo)簽，注明配制試劑的時間，名稱，濃度。對于一些見光易分解的溶液要置于棕色瓶中儲存。并且注意儲存的時間。

生化工程研究室實驗技能系列講座(二)主講人：賈老師協(xié)理：譚老師整理：林永賢

培養(yǎng)基的配制中的注意事項

培養(yǎng)基是供微生物生長、繁殖、代謝的混合養(yǎng)料。正確配制培養(yǎng)基是對從事微生物研究人員的一個基本要求。由于微生物具有不同的營養(yǎng)類型，對營養(yǎng)物質(zhì)的要求也各不相同，加之實驗和研究的目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，使用的原料也各有差異，使得配制培養(yǎng)基沒有一個統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。雖配制方法各異，但總的來說還是要注意以下幾個問題。1.藥品

實驗所用藥品要結(jié)合實驗室實際情況只要有效成分一致，例如酵母膏/酵母粉，瓊脂條/瓊脂粉。注意分析純和工業(yè)純藥品之間的區(qū)別，用時應(yīng)該注意有效成分換算。

工業(yè)性實驗應(yīng)盡可能采用工業(yè)原料，這樣有利于放大。另外，選用工業(yè)性原料時，也應(yīng)注意有效成分換算。2.藥品的稱量

對于發(fā)酵培養(yǎng)基所用的藥品，一般用電子天平（精確度0.1g）即可，請勿使用分析天平（精確度為0.0001g），會造成儀器不必要的浪費(fèi)。對于需要微量的藥品，先用電子天平稱量后，再配制成一定濃度的母液。配制培養(yǎng)基時稀釋一定倍數(shù)即可。3.培養(yǎng)基用水

一般采用去離子水，有特殊要求的除外。4.藥品之間的相互影響

有些藥品之間配制時會發(fā)生化學(xué)反應(yīng)而產(chǎn)生沉淀，配制這些培養(yǎng)基時應(yīng)該注意。盡量避免沉淀的產(chǎn)生。例如有些可以分別配制溶液滅菌冷卻后再無菌混合。

例如，有一培養(yǎng)基（洛克氏液）組成為：氯化鈉8g，氯化鉀0.2g，氯化鈣0.2g，氯化鎂0.01g，磷酸氫二鈉2g，磷酸二氫鉀0.3g，蒸餾水1000ml。滅菌時應(yīng)該先將氯化鈣、氯化鎂另分裝于小瓶，高壓滅菌后再合并以免Ca2+與PO43-化合，產(chǎn)生磷酸鈣沉淀。5.藥品的溶解一些需要加熱才能溶解的藥品在加熱過程中需要攪拌，人不可離開，以防發(fā)生意外。例如瓊脂條的溶解和高濃度葡萄糖溶液的配制。6.滅菌操作

藥品的滅菌要結(jié)合藥品的具體情況，不可套搬參考書上介紹的通用滅菌條件（121℃，0.1MPa，20min）。例如，葡萄糖滅菌溫度稍低，一些抗生素或活性物質(zhì)等不能滅菌只能用0.45um或0.22um膜過濾。實例：

一、肉湯培養(yǎng)基的配置1實驗材料

1.培養(yǎng)基組成牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，氯化鈉0.5％，pH值7.2，固體時加瓊脂2％。

2.試劑6molL-1HCl、10％NaOH。方法與步驟

1.先取所需水量的一半放于燒杯中，然后稱取蛋白胨加入水中，加熱溶解。2.取一載玻片放于電子天平（精確度0.1g）上，稱取所需牛肉膏，然后把牛肉膏和載玻片一同放入燒杯中，加熱溶解。3.稱氯化鈉，加入上述溶液中溶解，補(bǔ)足水量。

4.待溶液冷至室溫時，測pH值，用NaOH調(diào)pH值至7.5～7.6（加熱滅菌以后，pH值下降0.3～0.4）。

5.做固體培養(yǎng)基時，加2％瓊脂，加熱溶解，補(bǔ)足蒸發(fā)水量。6.滅菌，條件為121℃，15～20min。

二、阿魏菇培養(yǎng)基的配制

阿魏菇是一種食用蕈菌，可采用袋栽或瓶栽的方法進(jìn)行養(yǎng)殖。它的培養(yǎng)基是一種典型的粗原料培養(yǎng)基。培養(yǎng)基組成：

雜木屑68%、棉籽殼10%、麩皮20%、紅糖1%、碳酸鈣1%，每50千克干料另加酵母片0.025克，過磷酸鈣0.25克，含水量65%，pH值自然。按要求稱量拌料裝瓶(袋)。經(jīng)高壓蒸汽滅菌1.5～2小時或常壓蒸汽滅菌6～10小時，冷卻到30℃以下接種。

生化工程研究室實驗技能系列講座(三)

主講人：賈老師協(xié)理：譚老師整理：曹偉鋒一、如何選題

1、做任何事，都要有應(yīng)用背景，要與老師討論，同時多查文獻(xiàn)，在此基礎(chǔ)上確定選題。

2、不要被文獻(xiàn)所禁錮，可以在方法上提出新觀點。

3、看文獻(xiàn)要帶著問題去看，若提不出問題，要和老師同學(xué)交流。

4、要大量閱讀外文，了解所研究課題的最新進(jìn)展。學(xué)習(xí)國外先進(jìn)的實驗方法，積極領(lǐng)會外文作者意圖。在閱讀外文文獻(xiàn)過程中，敢于批判和質(zhì)疑，敢于寫信向國內(nèi)外（尤其是國外）同行請教。二、開題報告與計劃寫的應(yīng)當(dāng)細(xì)些。

詳細(xì)的計劃可以盡早發(fā)現(xiàn)實驗中需要解決的問題，避免實驗的盲目性。三、實驗進(jìn)行中要及時跟蹤最新的文獻(xiàn)，要求有一些創(chuàng)意。

四、要全面了解課題的國內(nèi)外（尤其是國外）研究現(xiàn)狀，研究思路，在閱讀大量

文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，多與老師、同學(xué)、同行交流，提出自己的研究思路。

實驗室基本操作與安全常識

1.挪動干凈玻璃儀器時，勿使手指接觸儀器內(nèi)部。

2.容量瓶是量器，不可用作盛器。容量瓶等帶磨口玻璃塞儀器的塞子，不要蓋錯。帶玻璃塞的儀器或試劑瓶等，如果暫時不用，要用紙條把瓶塞和瓶口隔開。

3.洗凈的儀器要放在架上或干凈紗布上晾干，不能用抹布擦拭，更不能擦拭其內(nèi)壁。

4.用完的藥品或容器放回指定的位置，以便他人能方便快速地找到。5.不要用濾紙稱量藥品。

6.定期清理冰箱，一般2個月，將過期的樣品，溶液等移出并刷凈容器。7.標(biāo)簽紙上要寫明物質(zhì)的名稱，規(guī)格和濃度，配制日期及配制人，標(biāo)簽應(yīng)貼在試劑瓶或燒杯的2/3處，試管等細(xì)長容器的上部。

8.取用試劑和標(biāo)準(zhǔn)溶液后，須立即將瓶塞蓋嚴(yán)，放回原處。取出的試劑或標(biāo)準(zhǔn)溶液如未用盡，切勿倒回原瓶中，以免污染試劑。

9.凡是發(fā)生煙霧，有毒氣體和有臭味氣體的實驗，均在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，櫥門應(yīng)緊閉，非必要時不得打開。

10.使用貴重儀器時應(yīng)十分重視。使用前應(yīng)熟知操作規(guī)程，第一次使用該儀器時最好能在專業(yè)人員監(jiān)督下完成；若有問題，隨時請專業(yè)人員解答。使用時要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程；發(fā)生故障時，應(yīng)立即關(guān)閉儀器，請示報告，不得擅自拆修。11.在用電爐加熱物品時，一定要用石棉網(wǎng)。這樣不但可以保證儀器的使用壽命，還可以保證操作人員的安全，尤其在用金屬容器加熱時。

12.實驗室中已經(jīng)配有足夠的插座，實驗中盡量不要使用接線板。如必須使用，用完后請及時收起來。

擴(kuò)展閱讀：生化和分子實驗技能考試內(nèi)容(最終)

《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實驗》實驗技能點分解如下：技觀測項目觀測點能稱電子天平量技術(shù)1、調(diào)整地腳螺栓高度，使水平儀內(nèi)空氣汽泡位于圓環(huán)中央。2、接通點源，按開關(guān)鍵直至全屏自檢。3、預(yù)熱30分鐘。為取得理想的測量結(jié)果，天平應(yīng)保持在待機(jī)狀態(tài)。4、使用除皮鍵，除皮清零。放置樣品進(jìn)行稱量。5、讀數(shù)時要保證門關(guān)閉6、開關(guān)門、按鍵要輕緩7、天平應(yīng)一直保持通電狀態(tài)，不使用時將開關(guān)鍵至待機(jī)狀態(tài)，使天平保持保溫狀態(tài)，可延長天平的使用壽命。8、在對天平清洗之前，將天平與工作點源斷開9、稱量廢棄物用刷子小心去除10、在清洗時，不能使用強(qiáng)力清潔劑（溶劑類等），應(yīng)使用中性清潔劑（肥皂）浸濕的清潔布擦拭（擦拭不要讓液體滲到天平內(nèi)部），然后使用干凈的清潔布拭干。普通天平1、稱量前調(diào)節(jié)螺絲達(dá)平衡，若不平衡，應(yīng)調(diào)節(jié)螺絲使之平衡。2、被稱量物要放在左盤中，砝碼要放在右盤中。3、取砝碼時，切不可用手拿取，而必須用鑷子夾取。4、添加砝碼時，應(yīng)先夾質(zhì)量大的砝碼，然后在夾質(zhì)量小的砝碼（最后再移動游碼）。5、被稱量的藥品不能直接放在托盤上（可在兩個托盤上各放一張大小相同的紙片，然后把被稱量的藥品放在紙片上，潮濕或具有腐蝕性的藥品必須放在表面皿或燒杯里稱量）。6、稱量完畢后，應(yīng)把砝碼放回砝碼盒中，把游碼移回零處，使天平恢復(fù)原來的狀態(tài)。容容量瓶使量用瓶使用1、使用前要檢驗是否漏水。程序是：加水→倒立，觀察→瓶塞旋轉(zhuǎn)180°→倒立，觀察。2、容量瓶不能用于溶解溶質(zhì)，更不能用玻璃棒攪拌。因此溶質(zhì)要先在燒杯內(nèi)溶解，然后再轉(zhuǎn)移到容量瓶中。3、不能將熱的溶液轉(zhuǎn)移到容量瓶中，更不能給容量瓶加熱。如果溶質(zhì)在溶解時是放熱的，則須待溶液冷卻后再移液。4、配制一定體積的溶液，須選用與該溶液體積相同規(guī)格的容量瓶。常用的有50mL、100mL、250mL、500mL、1000mL等規(guī)格。5、觀察所加液體是否達(dá)容量瓶的刻度線，一定要平視，使液面的最低點剛好與刻度線相平。6、如果加水定容時超過了刻度線，不能將超出的部分再吸走，必須重新配制。因為吸走一部分液體雖然溶液的體積達(dá)到了要求，但吸走的部分液體帶走了一部分溶質(zhì)，使所配溶液的濃度偏低。7、容量瓶通常不用于貯存試劑，因此，配制好的溶液要倒入試劑瓶中，并貼上標(biāo)簽。移移液管使液用管使用1、取液時移液管的位置（液面以下）1分2、調(diào)整液面時移液管是否垂直（要垂直）1分3、調(diào)整液面時眼光的位置（視線、液面、標(biāo)線均應(yīng)在同一水平面上）2分4、放液時移液管尖是否與容器接觸（管尖要與容器壁觸碰）2分5、液體流完后,是否有再接觸容器15秒（要保持15秒的觸碰,使其流盡）1分6、是否吹管（無需吹管）1分7、移液管使用前的洗滌（除分別用洗滌液、水洗滌外，還需用少量被移取的液體洗滌)1分8、使用前的洗滌方法：先慢慢地吸入少量洗滌的水或液體至移液管中，用食指按住管口，然后將移液管平持，松開食指，轉(zhuǎn)動移液管，使洗滌的水或液體與管口以下的內(nèi)壁充分接觸，再將移液管持直，讓洗滌水或液體流出，如此反復(fù)洗滌數(shù)次1分移液槍

移液槍使用1、量程的調(diào)節(jié)：由大調(diào)小和由小調(diào)大（如果要從大體積調(diào)為小體積，則按照正常的調(diào)節(jié)方法，逆時針旋轉(zhuǎn)旋鈕即可；但如果要從小體積調(diào)為大體積時，則可先順時針旋轉(zhuǎn)刻度旋鈕至超過量程的刻度，再回調(diào)至設(shè)定體積，這樣可以保證量取的最高精確度。）2分使用2、調(diào)最大、最小量程時，是否超過量程范圍（將按鈕旋出量程，否則會卡住內(nèi)部機(jī)械裝置而損壞了移液槍）1分3、槍頭（吸液嘴）的裝配（將移液槍（器）垂直插入槍頭中，稍微用力左右微微轉(zhuǎn)動即可使其緊密結(jié)合。槍頭卡緊的標(biāo)志是略為超過O型環(huán)，并可以看到連接部分形成清晰的密封圈。錯誤操作：使勁地在槍頭盒子上敲幾下，這時錯誤的做法，因為這樣會導(dǎo)致移液槍的內(nèi)部配件（如彈簧）因敲擊產(chǎn)生的瞬時撞擊力而變得松散，甚至?xí)��?dǎo)致刻度調(diào)節(jié)旋鈕卡住。）1分4、移液時的操作姿勢：吸取液體時，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液面下2-3毫米1分5、移液的方法：一是前進(jìn)移液法。用大拇指將按鈕按下至第一停點，然后慢慢松開按鈕回原點。接著將按鈕按至第一停點排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點吹出殘余的液體。最后松開按鈕。二是反向移液法。此法一般用于轉(zhuǎn)移高粘液體、生物活性液體、易起泡液體或極微量的液體，其原理就是先吸入多于設(shè)置量程的液體，轉(zhuǎn)移液體的時候不用吹出殘余的液體。先按下按鈕至第二停點，慢慢松開按鈕至原點。接著將按鈕按至第一停點排出設(shè)置好量程的液體，繼續(xù)保持按住按鈕位于第一停點（千萬別再往下按），取下有殘留液體的槍頭，棄之。4分6、移液器的放置：將其豎直掛在移液槍架上，但要小心別掉下來。移液器槍頭內(nèi)具有液體時，移液器的拿放。（不得水平放置或倒置）1分沉有機(jī)溶劑淀沉淀技術(shù)1、操作溫度（低溫下操作，冰鹽浴中進(jìn)行）1分2、有機(jī)溶劑的選用（能與水互溶）1分3、有機(jī)溶劑的加入（緩慢且不斷攪拌以免局部過濃）1分4、鹽濃度（溶液中鹽濃度以不超過5%為宜，少量的中性鹽對蛋白質(zhì)變性有良好的保護(hù)作用，過高會增加蛋白質(zhì)在水中的溶解性，降低了有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)的效果。）1分5、有機(jī)溶劑沉淀的原理（有機(jī)溶劑能降低溶液的介電常數(shù)，減小溶劑的極性，從而削弱了溶劑分子與蛋白質(zhì)分子間的相互作用力，增加了蛋白質(zhì)分子間的相互作用，導(dǎo)致蛋白質(zhì)溶解度降低而沉淀。）2分6、影響有機(jī)溶劑沉淀的因素（溫度、樣品濃度、pH值、離子強(qiáng)度）4分鹽析技術(shù)1、如何查找硫酸銨飽和度表格2分2、何謂硫酸銨的飽和度（在飽和溶液中的百分?jǐn)?shù)）2分3、如何判斷所需添加的硫酸銨的量1分4、添加硫酸銨時應(yīng)如何操作（在加入之前要先將其研成細(xì)粉不能有塊，加入鹽時應(yīng)該緩慢均勻，攪拌也要緩慢，少量多次加入，尤其到接近計劃飽和度時，加鹽的速度更要慢一些，以免引起局部的鹽濃度過高，導(dǎo)致不應(yīng)有的蛋白質(zhì)沉淀。）2分5、溫度的影響（一般情況蛋白質(zhì)鹽析對溫度要求不嚴(yán)，可在室溫下進(jìn)行，但對于某些對溫度敏感的酶，要求在0℃~4℃下操作）1分6、鹽析的原理（大量的中性鹽奪走了水分子，破壞了蛋白質(zhì)水膜，暴露出疏水區(qū)域，同時又中和了電荷，破壞了親水膠體，從而使蛋白質(zhì)沉淀。）2分過減壓抽濾1、減壓抽濾所用裝置名稱（抽濾瓶、布氏漏斗、真空泵）3分2、濾紙的操作：貼好濾紙，濾紙的大小應(yīng)剪得比布氏漏斗的內(nèi)徑略小，以能恰好蓋住瓷板上的所有濾小孔為度。先由洗瓶擠出少量蒸餾水潤濕濾紙，稍微抽吸。使濾紙緊貼在漏斗的瓷板上，然后進(jìn)行抽氣過濾。3分加液時的操作：過濾時，應(yīng)該將澄清的溶液沿玻璃棒倒入漏斗中1分3、在布氏漏斗上清洗沉淀的操作：應(yīng)停止抽濾，讓少量洗滌劑緩慢通過沉淀，然后進(jìn)行吸濾。2分4、布氏漏斗的出液口的方向1分研冰浴研磨磨技術(shù)

1、如何有效研磨？2、磨而非捶3、石英砂的作用4、冰浴如何做5、研磨完成的判定液氮研磨1、小心凍傷2、使用的研缽（瓷,玻璃）？3、使用前研缽預(yù)冷4、研缽內(nèi)不能有水5、研磨操作應(yīng)快速6、研磨后樣品粉末迅速放置到容器電SDS-PAG泳E電泳技術(shù)1、凝膠板的洗滌（次序、干凈面的保證）2、凝膠板的安裝3、電泳槽的安裝（板的上下）4、如何正確用瓊脂封底？5、膠配置的注意事項（冰箱保存、順序、凝固溫度）6、灌膠7、電泳液添加的位置8、樣品的制備（2×溶液的使用、如何沸水�。�9、上樣的操作10、電泳儀的使用11、變換電壓的時間確定12、停止電泳的時間確定13、回收電泳液14、剝膠15、染色時間和溫度16、脫色時間和效果判斷17、結(jié)果分析（條帶的位置和深淺說明什么？）18、為什么該實驗是按分子量分離蛋白質(zhì)？19、2×樣品溶解液中的各成分的作用20、2×、5×中數(shù)字的意義瓊脂糖凝膠電泳1、瓊脂糖凝膠的配制2、電泳水平槽的安裝3、加樣孔的方向4、電泳上樣緩沖液的配方及各個組分的作用（蔗糖、溴酚藍(lán)）5、電泳上樣的操作6、電泳時電壓的設(shè)置7、電泳終止的判斷8、核酸的檢測方法（EB染色、大分子染料）9、EB操作的安全事項10、瓊脂糖電泳的原理離臺式高速心離心機(jī)技術(shù)冷凍高速離心機(jī)1、離心樣品的平衡2、轉(zhuǎn)速的設(shè)置3、時間的設(shè)置1、離心樣品的平衡2、轉(zhuǎn)速的設(shè)置3、時間的設(shè)置4、離心溫度的設(shè)置薄板層薄板準(zhǔn)備1、活化的原因2、活化溫度3、活化的時間析樣品準(zhǔn)備1、樣品中不能含有鹽，否則有拖尾2、樣品溶液要有一定濃度不能太稀影響分離效果技1、斑點�。ㄖ睆讲怀�過2mm）、均勻、點樣量適量（多-容易擴(kuò)散和拖尾，少-組分丟失）術(shù)點樣2、距離薄板下沿2cm3、少量多次點(1-5)，每點一次用吹風(fēng)機(jī)冷風(fēng)吹干4、幾個不同的樣要在同一直線上展層1、展層劑的選擇2、層析缸的使用3、展層劑的界面要低于點樣線Rf測定溶緩沖液的液配制配制特殊溶液的配制萃萃取技術(shù)取技術(shù)PPCR儀的C使用R技術(shù)反應(yīng)體系加樣1、Rf值為原點到層析點中心的距離（r）與原點到溶劑前沿的距離（R）的比值1、配方2、容量瓶的使用3、配制方法1、硫酸溶液的配制方法1、振蕩均勻2、靜置時間3、分離4、防止液體泄露1、程序設(shè)計7分2、開關(guān)蓋要輕2分3、正確放入PCR管1分4、每步驟的意義1、PCR管的選擇2分2、加樣順序（由多到少）2分3、最后離心2分4、注意污染4分5、正確使用移液槍質(zhì)質(zhì)粒提取粒技術(shù)提取技術(shù)高高壓滅菌壓技術(shù)滅菌技術(shù)1、判斷菌液濃度是否達(dá)到要求3分2、操作過程注意污染2分3、加入溶液2后不要劇烈振蕩，只需輕輕顛倒幾次離心管。1分4、加入溶液3后，復(fù)性時間不宜過長1分5、溶液2現(xiàn)用現(xiàn)配1分6、如何分離離心后產(chǎn)生的絮狀沉淀1分7、正確溶解質(zhì)粒DNA1分1、是否向外層鍋內(nèi)加入適量的水；2分2、滅菌物品是否裝得太擠；1分3、螺栓是否旋緊；1分4、是否設(shè)置好滅菌所需的壓力、溫度和時間；1分5、排氣閥是否打開；1分6、是否在冷空氣完全排盡后關(guān)上排氣閥；1分7、是否在滅菌所需時間到后切斷電源；1分8、是否讓滅菌鍋內(nèi)溫度自然下降；1分9、是否在壓力降至“0”時打開排氣閥。1分感受

細(xì)胞對數(shù)生長期的1、所搖菌液是否是活化過的；1分2、搖床的溫度及轉(zhuǎn)數(shù)是否正確；1分態(tài)確定制備技術(shù)轉(zhuǎn)熱激處理化技術(shù)超凈臺的使用涂板玻玻璃器皿璃的洗滌技器術(shù)皿的洗滌技術(shù)pH值的測定pH試紙的使用pH計的使用3、是否是每隔20-30分種測量菌液的OD值；1分4、測OD值前分光光度計是否預(yù)熱；1分5、測OD值前分光光度計是否調(diào)波長、調(diào)零和調(diào)“100”；1分6、測OD值是否以未接種的作為對照；2分7、所測OD值是否在0.3－0.5之間，不同的菌株具體數(shù)值不同。3分1、熱激處理的時間2、熱激處理的溫度特別要控制熱激時間（42℃，90s）1、使用前應(yīng)開啟風(fēng)機(jī)2、用75%的酒精擦拭臺面。注意有機(jī)玻璃面不能用酒精擦3、紫外燈照射30分鐘，然后關(guān)閉紫外燈。1、應(yīng)用超凈臺內(nèi)，微開培養(yǎng)皿蓋，用推子來回涂均勻。2、如何判斷推子已冷卻1、洗前應(yīng)用洗滌劑浸泡2、試管刷洗后倒扣3、玻璃器皿的內(nèi)外壁應(yīng)不掛水珠1、不能把試紙直接放入待測溶液，應(yīng)用玻璃棒沾取少量溶液將其涂在pH試紙上（5分）2、顏色比對觀察的時間（馬上進(jìn)行觀察）（5分）1、使用前需校正（采用兩點校準(zhǔn)法）2、測量完后，應(yīng)用蒸餾水沖洗電極。3、電極如何保護(hù)。1、預(yù)熱儀器（20分鐘）2、使用前調(diào)零與校正3、取比色皿及擦拭的方法4、測量前，比色皿應(yīng)用待測溶液清洗5、可見光檢測與紫外光檢測使用的比色皿是否有差異？為什么？分分光光度光儀的使用光度法1、移液管、移液器的使用2、SDS-PAGE電泳3、離心機(jī)的使用4、PCR儀的使用5、高壓滅菌技術(shù)6、分光光度儀的使用7、抽濾

8、瓊脂糖電泳

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