細胞學實驗考試總結

名詞解釋

1.滲透壓：水從低滲溶液穿過半透膜進入高滲溶液時產生的壓力。水分子通過半透膜向溶

液擴散的現象稱為滲透現象，簡稱滲透；溶液促使膜外水分子向內滲透的力量即為滲透壓。

2.高滲：體內的滲透壓高于體外，水由環(huán)境中向體內擴散，體內的鹽分向外擴散。

通過排泄作用排出多余的水，鹽分通過食物和組織攝入。

3.低滲：體內的滲透壓低于體外，水由體內向環(huán)境中擴散，環(huán)境中的鹽分向內擴散。水和

鈉同時缺失，但缺水少于缺鈉，血清鈉低于正常范圍，細胞外液呈低滲狀態(tài)

4.凝集素：是一類含糖的并能與糖專一結合的蛋白質，它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的

作用。凝集素使細胞凝集是由于它與細胞表面的糖分子連接，在細胞間形成“橋”的結果，加入與凝集素互補的糖可以抑制細胞的凝集。

5.差速離心：利用不同物質沉降速率的差異，在不同離心速度下分離和收集不同顆粒的離

心技術。常用于分離細胞勻漿中的各種細胞器。6.熒光：某些物質在一定短波長的光的照射下吸收光能進入激發(fā)態(tài)，從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時，

就能在極短的時間內放射出比照射光波長更長的光，這種光成為熒光。

7.自發(fā)熒光：有些生物體內的物質受激發(fā)光照射后可直接發(fā)出熒光，成為自發(fā)熒光。8.次生熒光：有的生物材料本身不發(fā)熒光，但它吸收熒光材料后同樣也能發(fā)出熒光，這種

熒光稱為次生熒光。

9.活體染色：是指對生活有機體的細胞或組織能著色但又無害的一種染色方法。分為體內

染色和體外染色（超活染色）。

10.細胞培養(yǎng)：在實驗室中用無菌操作的方法將動物體內的組織（或器官）取出，模擬動物

體內的生理條件，在體外進行培養(yǎng)，使其不斷地生長、繁殖，人們借以觀察細胞的生長、繁殖、細胞分化以及細胞衰老等過程的生命現象。

11.組織培養(yǎng)：從機體分離出的組織或細胞在體外人工條件下培養(yǎng)生長的技術。

12.原代細胞培養(yǎng)：是指直接從動物體內獲取的細胞、組織或器官，經體外培養(yǎng)后，直接到

第一次傳代為止。

13.傳代細胞培養(yǎng)：是指細胞從一個培養(yǎng)瓶以1:2或1:2以上的比例轉移接種到另一培養(yǎng)瓶

的培養(yǎng)。原代培養(yǎng)形成的單層細胞匯合以后，需要進行分離培養(yǎng)，否則細胞會因生成空間不足或由于細胞密度過大引起營養(yǎng)枯竭，都將影響細胞的生長，這一程序常稱為傳代或傳代培養(yǎng)。

原理：1.細胞骨架原理細胞骨架是細胞內以蛋白質纖維為主要成分的網絡結構。根據蛋白質纖維的直徑，組成成分和組裝結構的不同可分為微絲微管和中等纖維，其對于維持細胞的形態(tài)結構及細胞運動物質運輸，能量轉換，信號傳導和細胞分裂等有重要的作用，本實驗采用去垢劑TritonX-100的緩沖液處理植物材料，可將細胞膜的膜結構和大部分蛋白質抽提調，但細胞骨架系統(tǒng)蛋白卻被保存下來，后者用R250染色在光學顯微鏡下可見一種網狀結構。

為什么用TritonX-100不用SDS

因為TritonX-100為去污劑，把骨架蛋白以外細胞膜細胞質蛋白剝離掉，無離子性。SDS有離子性，去污性強容易破壞細胞膜。PBS作用：PH保證、與細胞滲透壓相近。戊二醛作用：固定蛋白，保證細胞形狀�？捡R斯亮藍R250作用:與蛋白特異性結合。2．細胞凝集反應:

在某一種蛋白如土豆中，有多個位點可以與其他細胞結合，而且蛋白之間可以聚集，使多個細胞聚集在一起。以PBS液加2%血細胞液作對照試驗因為太稀不容易使紅細胞凝集，太濃分辨不出來是自身堆積在一起還是由于凝集素使其凝集在一起。

3.Feulgen染色原理DNA經弱酸水解，其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵打開，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑反應，形成紫紅色的化合物，使細胞內含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應。紫紅色的產生，是由于反應物的分子內含有醌基，醌基是一個發(fā)色團，所以具有顏色。對照組預先用熱三氯醋酸或DNA酶處理，抽提去細胞中的DNA而得到陰性反應，從而證明了Feulgen的專一性。亞硫酸配制：10%偏重亞硫酸鈉水溶液5ml。蒸餾水100ml。1mol/LHCL5ml。

4.傳代細胞培養(yǎng)原理第一步制備細胞懸液，當細胞生長成致密單層時，它很容易被蛋白水解酶和EDTA所破壞。因為EDTA對鈣、鎂離子具親和力，而這兩種離子又是細胞保持緊密結合所必需的因素。所以一般采用胰蛋白酶和EDTA的混合物，作為消化液。培養(yǎng)基用EMEM液(90%)犢牛血清(10%)雙抗、3%谷氨酰胺1ml、7.4%NaHCO3（PH7.0~7.2）.其核心是培養(yǎng)基與消化液（0.02%EDTA或0.004%EDTA+0.5%胰蛋白酶液各一半）。主要步驟是消化與分裝。5.動物細胞培養(yǎng)

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：一便于研究各種物理，化學等外界因素對細胞生長發(fā)育和分化等的影響，二便于對細胞生長及發(fā)育過程的觀察

細胞培養(yǎng)必須滿足兩個條件：一是供給細胞存活所必須的條件，二是嚴格控制無菌條件

6.ABO血型用已知的IgM類特異抗體（標準血清）與被檢紅細胞在室溫條件下、鹽水介質中反應，根據紅細胞是否出現凝集現象來測定被檢紅細胞膜上有無與血型抗體相對應的抗原，從而判斷和鑒定被檢者的血型。大部分為RH陽性。正定型反定型

被

（標準（標準紅細胞+被檢者血

檢

血清+清）

者

被檢者

血

紅細

型

胞）

O型

抗抗A型紅B型紅

紅細

AB細胞細胞

胞

＋－A－＋－－＋B＋－－＋＋AB－－－－－O＋＋－7.細胞融合原理

掌握利用聚乙二醇為介導物對各類細胞的融合方法。聚乙二醇分子能改變各類細胞的膜結構，使兩細胞接觸點處質膜的脂類分子發(fā)生疏散和重組，由于兩細胞接口處雙分子層質膜的相互親和以及彼此的表面張力作用，使細胞發(fā)生融合。

影響融合率的因素1.溫度2.PEG分子量3.細胞融合時PEG濃度。4.PEG作用時間5.所要進行融合細胞種類。8.流式細胞儀原理

流式細胞儀的工作原理是將待測細胞放入樣品管中，在氣體的壓力下進入充滿鞘液的流動室。在鞘液的約束下細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，形成細胞柱。通過對流動液體中排列成單列的細胞進行逐個檢測，得到該細胞的光散射和熒光指標，分析出其體積、內部結構、DNA、RNA、蛋白質、抗原等物理及化學特征。作用：1、計數2、測細胞周期3、測特異性蛋白影響其測量效果因素：9.細胞膜屏蔽哪些：

鹽、無機離子、極性大分子。

允許進入：脂溶性、水、非極性、有機小分子、NH4+10.線粒體和液泡的染色

堿性染料的膠粒表面帶陽離子，酸性染料膠粒表面帶陰離子，而被染得部分本身也是具有陰離子或陽離子，這樣他們彼此之間就能發(fā)生吸引作用，一般以堿性染料最為適用，可能因為它具有溶解在脂類的特性，易于被細胞吸收。詹納斯綠B和中性紅兩種堿性染料是活體染色劑中最重要的染料，對于線粒體和葉泡系的染色各有專一性11.葉綠體分離與熒光觀察將組織勻漿后懸浮在等滲介質中進行差速離心，是分離細胞器的常用方法（先1000r/min2min棄沉淀再3000r/min5min棄上清）12.細胞膜的滲透性原理

將紅細胞放入數種等滲溶液中，由于紅細胞對各種溶質的透性不同，有的溶質可以深入，有的溶質不能滲入，滲入的溶質能提高紅細胞的滲透壓，所以促使水分進入細胞，引起溶血。由于溶質投入速度不同，因此溶血時間也不同。

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